本发明公开了一种鼻腔乳头状瘤组织的单细胞悬液制备方法及应用，涉及生物检测技术领域，该方法的酶溶液为II型胶原酶、胰蛋白酶、脱氧核糖核酸酶I的无钙镁PBS溶液；该方法包括的步骤为酶解和孵育鼻腔乳头状瘤肿瘤组织，过滤得到细胞悬液，红细胞裂解得到细胞沉淀，清洗得到鼻腔乳头状瘤单细胞悬液。本发明制备得到的鼻腔乳头状瘤单细胞悬液中单细胞活性高，数量充足，且细胞分离度高，有利于进行下游包括高通量单细胞测序、细胞分选后进行单个细胞的测序等实验。