本发明公开了一种壳聚糖基二醛六亚甲基异氰酸酯荧光水凝胶膜及其制备方法和应用，属于生物质功能高分子材料技术领域。该方法使用壳聚糖作为基础材料，利用双醛化的二醛六亚甲基异氰酸酯改性壳聚糖形成壳聚糖荧光探针材料，通过席夫碱反应共价连接壳聚糖，获得壳聚糖基二醛六亚甲基异氰酸酯荧光水凝胶膜。本发明水凝胶膜可在水体系中检测Mn2+，该凝胶薄膜作为Mn2+荧光探针具有良好的选择性检测性能，具有较高的交联密度，使壳聚糖凝胶膜在具有亲水性和力学性能好的特点，同时具有优秀的溶胀能力，为高效和高灵敏度检测水体中Mn2+及壳聚糖等生物质材料的高值化利用提供了新的方法。