本发明涉及病毒检测技术领域，具体公开一种RF‑RAA检测鸭圆环病毒的引物和探针组合及其应用。所述检测鸭圆环病毒的引物和探针中，上游引物的序列如SEQ ID NO:1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO:2所示，探针的序列如SEQ ID NO:3所示。本发明针对DuCV的保守基序设计特异性引物和探针，建立了一种应用于检测DuCV的RF‑RAA方法，使扩增产物累积与荧光信号强弱呈正相关，在41℃下反应15min可经仪器观察到明显结果，且方法的特异性强、灵敏度高、最低检测限可达1拷贝/μL，准确度好，对鸭圆环病毒的早期临床检测和流行病学调查提供了可靠保障，对疫病防控有积极意义。