本发明提供了一种基于CRISPRi调控的利用谷氨酸棒状杆菌合成乙醛酸的方法，该方法包括通过dCas9表达盒基因置换谷氨酸棒状杆菌的乙醛脱氢酶编码基因，通过异柠檬酸脱氢酶编码基因与苹果酸合成酶编码基因的sgRNA转录单元置换谷氨酸棒状杆菌的乳酸脱氢酶编码基因，并过表达谷氨酸棒状杆菌的异柠檬酸裂合酶编码基因，得到谷氨酸棒状杆菌工程菌株，且培养所述工程菌株发酵合成乙醛酸。本发明以谷氨酸棒状杆菌为出发菌株，敲除了其支流代谢关键酶乳酸脱氢酶编码基因和乙醛脱氢酶编码基因，建立了CRISPRi调控体系，利用异柠檬酸脱氢酶编码基因和苹果酸合成酶编码基因表达水平下调，同时过表达异柠檬酸裂合酶编码基因，建立了利用谷氨酸棒杆菌生物合成乙醛酸的方法。