本实用新型公开了一种层析柱加压装置，包括：气泵；输气机构，其包括输气管、送气球和止气阀；输气管的进气端连接气泵的出气端；送气球为空心的球形；送气球的一端设有进气口，送气球和进气口相对的一端设有第一出气口，送气球的侧壁上设有第二出气口；进气口连接于输气管的出气端；止气阀贴覆送气球内壁设置以控制第一和第二出气口的开/闭；封闭塞，其为气囊；气囊的中部开设有通孔，输气管穿设在通孔内，且送气球位于气囊的底端，并使第一出气口位于通孔的下端开口；气囊与第二出气口对应的位置开设有贯通至气囊内部的通气孔。其能够配合多种规格的层析柱的使用，使得层析柱中混合物的分离效率大大提高，且装置价格低廉，适合大规模推广使用。