本发明公开了嗜热甘露聚糖酶ManBK突变体及其应用。对嗜热甘露聚糖酶ManBK的8个关键区截短或加长，采用定点突变技术构建了长度突变体，最适温度相较野生型重组酶大部分都有所下降，通过与重组原酶半衰期的对比发现，突变酶ManBK‑Ⅵ表现出最好的热稳定性。通过对ManBK敏感的氨基酸残基进行优化，同样采用定点突变的方法构建了6个突变体，突变酶ManBK‑P63G和ManBK‑P172G的最适温度为80℃，与野生型重组酶一致。其他两个突变酶最适温度相对较低：ManBK‑P169G最适温度为50℃，ManBK‑P244G最适温度为70℃。