本发明提供了一种单柱两相混合模式整体柱及其制备方法与应用，整体柱的制备方法包括以下步骤：制备亲水模式预聚液和疏水模式预聚液；向亲水模式预聚液和疏水模式预聚液内加入N,N‑二甲基苯胺后，将二者加入同一柱管内，得到混合模式整体柱。采用本发明中的方法制备得到的混合模式整体柱，可对甘草提取液中两种不同性质的化合物甘草查尔酮A和异甘草素同时进行富集和纯化，使得甘草查尔酮A和异甘草素富集和纯化操作更为简便，具有节省样品、经济环保等优势。