本发明涉及一种铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶及应用，人工铜绿假单胞菌噬菌体裂解酶，其核酸序列1和2，氨基酸序列3和4，利用基因工程技术，在原有革兰氏阴性菌噬菌体裂解酶的N端添加聚阳离子九肽、疏水五肽开发能够高效杀灭铜绿假单胞菌、恶臭假单胞菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的人工裂解酶。该裂解酶及其衍生物可单独使用或与表面活性剂协同作用，能够特异型灭活铜绿假单胞菌、芽孢杆菌，该裂解酶可去除以及抑制由上述微生物形成的生物被膜，为目前防治铜绿假单胞菌、地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌的感染和控制食品中的地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌等细菌造成的生物被膜污染提供一种安全、无毒副作用的酶制剂来源。