本发明公开了一种基于PRET的磷光探针特异性引物定量检测凝血酶的方法。为了提高其灵敏度，本发明在TBA上进行修饰，得到TBA‑BHQ2探针。利用水热合成法合成的磷光QDs作为能量供体，TBA‑BHQ2作为能量受体，构成磷光共振转移检测机制，导致磷光猝灭。由于凝血酶适配体与凝血酶之间有较强的结合，从而使MPA包覆的Mn掺杂ZnS磷光量子点与TBA‑BHQ2混合猝灭体系中的TBA‑BHQ2离开量子点表面与凝血酶形成新的复合物，从而使体系磷光强度恢复。相对于荧光量子点，磷光量子点因其磷光寿命长、可避免自体荧光和散色光的干扰、选择性强、检测时无需加入任何除氧剂和诱导剂等优点，在检测中运用更加广泛和灵敏。