本发明涉及一种寡聚精氨酸修饰的磷脂与其组装的纳米粒及制备方法和应用，寡聚精氨酸肽链用二环己基碳二亚胺/N‑羟基琥珀酰亚胺活化后，与磷脂酰乙醇胺反应，进行纯化得到寡聚精氨酸修饰的磷脂酰乙醇胺；或者寡聚精氨酸肽链与DCC/NHS活化的磷脂酸反应，纯化得到寡聚精氨酸修饰的磷脂酸；或者寡聚精氨酸肽链与对硝基苯基氯甲酸酯活化的磷脂酰胆碱反应，进行纯化得到寡聚精氨酸修饰的磷脂酰胆碱。寡聚精氨酸修饰的磷脂所组装的纳米粒，用于负载基因、小干扰RNA、多肽或蛋白类药物、抗体以及化学药物，形成的载药纳米粒的水分散液，用于体外细胞或体内局部、静脉注射递送药物。有效促进纳米粒进入细胞，提高胞内药物递送效率。