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奶牛乳房炎致病菌三联表位基因与石斑鱼c型溶菌酶基因重组腺病毒的构建方法和应用

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成果名称：	奶牛乳房炎致病菌三联表位基因与石斑鱼c型溶菌酶基因重组腺病毒的构建方法和应用	关键字：	clyz , tre , egfp , t2a , 重组 , 病毒 , 细胞 , pdc315 , 基因 , ad	应用行业：	农、林、牧、渔业
高新技术领域：	农业技术	所在地：	天津市	知识产权类型：	发明专利
知识产权编号：	CN201710908690.4	成果体现形式：		成果属性：
成果所处阶段：	授权	成果水平：	国内先进	研究形式：
学科分类：		战略新兴产业：	生物	课题来源：
第一完成单位名称：	天津农学院	第一完成单位属性：		技术成熟度：
合作方式：	专利许可	交易价格(万)：	0.50	所属十强产业：

本发明公开了一种奶牛乳房炎致病菌三联表位基因与石斑鱼c型溶菌酶基因重组腺病毒的构建方法和应用。试验中选取奶牛乳房炎主要致病菌特异性蛋白，通过ABCpred方案与BepiPred方案预测获得每种蛋白的2个B细胞优势表位将所得优势表位进行连接获得TRE序列，GeneBank上得到cLYZ序列并进行哺乳动物细胞偏好性密码子优化。在TRE序列与cLYZ序列之间插入高剪切效率的Thoseaasigna virus 2A(T2A)自剪切肽，合成后得到含有目的基因片段的pMD-19T载体。将TRE基因、T2A基因、cLYZ基因亚克隆到穿梭载体pDC315-MCS-EGFP上；利用LipoFiterTM脂质体转染法将重组穿梭载体与腺病毒大骨架pBHGlox(delta)E1,3cre共转染HEK293细胞，实现同源重组，获得重组腺病毒Ad-TRE-T2A-cLYZ-EGFP。