本发明涉及接枝RGD短肽温敏可注射水凝胶及其制备方法和应用。该可注射水凝胶主要由聚合后具有温敏性的单体、含有羧基基团的单体、RGD短肽先后通过共聚反应、脱水酯化反应、无铜点击化学制备短肽功能化聚合物，经过与细胞共混，制得含有细胞的接枝RGD短肽温敏可注射水凝胶。利用可注射水凝胶的温敏特性，达到溶胶‑凝胶的相转变，以及短肽的生物活性及其配体识别位点特征，促进细胞在可注射水凝胶支架内部的黏附、增殖和基因的特异性表达。本发明的可注射水凝胶具有优异的促细胞黏附、增殖特性、可控的温敏性、可逆的可注射性、细胞可释放功能。可用于可注射细胞支架、药物控释、组织再生修复、肿瘤治疗等领域。