本发明公开一种基于高场核磁共振技术检测多肽药物结构的方法，涉及多肽药物及其它功能多肽结构检测领域，通过对无标记的多肽样品进行一维核磁共振和二维核磁共振，提取多肽的化学位移归属和空间距离约束和二面角约束，统计距离约束的使用情况，统计结构的角度和距离约束的违约情况，并计算结构的均方根偏差、能量数据和拉氏图数据，得到多肽药物的三维结构。