本发明涉及一种H1N1流感病毒检测方法及其试剂盒。本发明利用简单快捷的化学偶联方法实现对灭活的完整H1N1流感病毒的高效捕获；利用能够特异性识别灭活A型H1N1病毒的DNA核酸适配体为识别探针实现对病毒的特异性识别,最后利用实时定量PCR实现对灭活的完整H1N1流感病毒的定量检测。本发明检出限为1ng/L,且对其他病毒没有响应，具有良好的特异性。结合纳米金还可以实现对H1N1病毒的比色检测，检出限为1ng/L。本发明方法以完整灭活病毒为靶标，以低成本的DNA核酸适配体为识别分子，具有安全性好和成本低的优点。而且灵敏度高，特异性好，成功用于咽拭子样品中H1N1的检测，具有很好的临床应用价值。