本发明公开了一种含梯度分布生物活性物质的纤维/微球复合膜及制备方法。该复合膜由上、下膜层及两层膜之间微球层构成，其中，上、下膜层是由聚丙交酯-co-乙交酯的纤维形成，微球层是由聚丙交酯-co-乙交酯与生物活性物质构成；其制备过程：在接收屏上以聚丙交酯-co-乙交酯溶液为原料，电纺纤维形成下膜层；在下膜层上以聚丙交酯-co-乙交酯溶液和骨形态发生蛋白-2溶液的乳液为原料，电喷及移动掩膜形成微球层；在微球层上以制备下膜层相同过程制备上膜层。本发明的优点在于，制备过程简单、条件温和，制得的含梯度分布生物活性物质的纤维/微球复合膜，用于骨界面组织的修复。