本发明属于药物化学和药理学技术领域，涉及一种灰黄霉素开环衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用，该灰黄霉素开环衍生物具有式(I)所示化学结构式，由灰黄霉素与高碘酸钠和催化量的三氯化钌在乙腈和水的混合溶剂中发生双键氧化断裂反应得到灰黄霉素开环中间体1。然后灰黄霉素开环中间体1与胺类化合物或含氮杂环化合物在HATU和DIPEA的N,N‑二甲基甲酰胺溶液中进行酰化反应，得到相应的开环衍生物。本发明得到的灰黄霉素开环衍生物具有较强的抗肿瘤活性，可用于制备抗肿瘤药物。