1.利用早期胚胎细胞开展抗乳房炎基因检测。发榜方利用荧光定量PCR技术已实现奶牛早期胚胎（7日龄胚胎）性别鉴定并应用于生产，拟在荧光定量PCR扩增体系基础上优化升级现有技术工艺，利用多靶点扩增等胚胎干细胞生产技术，实现早期胚胎性别鉴定的同时，开展抗乳房炎基因检测，填补性控胚胎生产领域技术空白。

2.利用基因编辑技术开展特色种质胚胎生产。发榜方没有胚胎干细胞研究经历，拟通过集成胚胎干细胞技术（ES)、胚胎干细胞介导的MS-GS技术，开展基因编辑，通过细胞克隆技术（SCNT）优化特色基因分子设计育种技术路线和工艺，建立特色种质胚胎生产技术工艺，建立奶牛特色新品系（如牛奶高表达人β-酪蛋白），使传统育种需要20-30年完成的目标在1-2年内实现，抢占世界荷斯坦牛分子育种技术制高点。

3.活体采卵-体外受精技术（OPU-IVF）工艺优化。由于活体采卵卵子核质成熟不同步导致发榜方的活体采卵获卵效率低，体外培养体系不稳定，平均每次仅获2-3枚可用胚胎，且冷冻存活率低。与美国、巴西等国平均每次OPU获得5-6枚可用胚胎的水平相比，差距明显。

1.早期胚胎细胞抗乳房炎基因检测技术研究。对奶牛桑囊期胚胎进行分割取样，采集4～10个胚胎细胞，研发、优化针对微量样品的多靶点扩增技术，实现胚胎性别鉴定及抗乳房炎基因SNP位点检测同步化。

2.基于基因编辑的荷斯坦特色种质胚胎生产技术研究。通过编辑功能基因和调控序列，开展多基因聚合育种，建立利用干细胞结合基因编辑技术进行核移植育种新体系，创制牛奶高表达人 β-酪蛋白的奶牛新种质。

3.活体采卵卵子核质同步成熟技术研究。对影响活体采卵获得卵子的成熟因素进行分子水平分析，进行核质同步成熟、单支冻精多次利用、优化培养液降低胚胎脂类含量等研究，进一步优化活体采卵-体外受精技术（OPU-IVF）工艺，提高OPU体外胚胎生产效率和冻胚移植妊娠率。

4.技术集成与示范。一是集成胚胎干细胞技术（ES)、胚胎干细胞介导的 MS-GS 技术、基因编辑和细胞克隆技术（SCNT），建立分子设计育种技术路线，创制优质、高产、健康、特色奶牛新种质胚胎生产技术体系。二是整合全基因组选育（GS）及分子标记选择（MS）、超数排卵胚胎移植（MOET）、胚胎性别及抗乳房炎基因同步鉴定（ESI）、活体采卵-体外受精（OPU-IVF）等技术，快速选育并组建高产、优质、健康核心育种母牛群。

 建立早期胚胎细胞抗乳房炎基因检测技术，形成基于基因编辑技术的特色种质胚胎生产技术工艺，优化活体采卵-体外受精技术（OPU-IVF）工艺，生产优质、高产、健康、特色奶牛新种质胚胎，快速选育并组建高产、优质、健康核心育种母牛群，强化乳制品的健康保健功能，培育我省乳业产业新经济增长点。

考核指标

1.形成早期胚胎细胞抗乳房炎基因检测技术1套，雌性、雄性胚胎性别鉴定准确率及抗乳房炎关键SNP基因型检测准确率均在95%以上。

2.基于基因编辑技术的特色种质胚胎生产技术工艺1套，建立具有多向分化潜能、可基因编辑的2株优秀（顶级）奶牛胚胎来源多能干细胞系，细胞克隆胚胎体外囊胚发育率达25%以上。   

3.生产含抗乳房炎基因型的雌性胚胎 200 枚。

4.优化活体采卵-体外受精技术（OPU-IVF）工艺1套，活体采卵每头次采卵获卵数21枚以上，可用卵数14枚以上，体外囊胚发育率达26%以上，生产体外性控胚胎1100 枚，常规冷冻体外胚胎情期受胎率达40%以上。

5.整合全基因组选育（GS）及分子标记选择（MS）、超数排卵胚胎移植（MOET）、胚胎性别及抗乳房炎基因同步鉴定（ESI）、活体采卵-体外受精（OPU-IVF）等技术，快速选育并组建高产、优质、健康核心育种母牛群200头以上。

6.技术攻关时限：不超过3年